1)Transport i zasady analizy próbek pobranych w brojlerni
Transport:
-próbki są przesyłane niezwłocznie do laboratorium.
-Podczas transportu próbki chroni się przed działaniem temperatury powyżej 25 st. C. i promieniami słonecznymi
-Jeśli próbki nie dotrą do laboratorium w ciągu 24 godz. od ich pobrania, należy je przechowywać w chłodziarce
Analiza laboratoryjna:
-w laboratorium próbki przechowywane są w stanie schłodzonym, aż do badania, które rozpoczyna się w ciągu 48 godz od otrzymania próbek i w ciągu 4 dni od daty ich pobrania
-próbki kurzu bada się osobno. Właściwy organ może zdecydować o dołączeniu ich do badań razem z parą okładzin na buty
- pary okładzin na buty należy rozpakować, unikając odpadnięcia przywierających do nich odchodów i umieścić je w 225 ml zbuforowanej wody peptonowej (BPW)
-badanie mające na celu wykrycie Salmonella spp. – zgodnie z horyzontalną metodą wykrywania Salmonella spp.
2) Opleśnienie wędlin
Objawia się w postaci białawych, szarych, szarozielonych nalotów, które są grzybnią pleśni. Opleśnienie jest zjawiskiem niepożądanym z wyjątkiem niektórych kiełbas surowych np. salami.
3) Badania biochemiczne potwierdzające Salmonelle (wymienić)
1) Posiew na agar TSI (trójcukrowy)
a)posiew kłuty słupka
b)posiew na skos agarowy
2) Wytwarzanie ureazy na agarze z mocznaikiem
3)Wykrywanie dekarboksylacji lizyny
4)Wykrywanie B-galaktozydazy
5)Reakcja Vages-Proskauera (VP)
6)Test na wykrywanie indolu
4) Drogi wnikania i przebieg kliniczny Listerii monocytogenes
Drogi wnikania do organizmu:
-przewód pokarmowy
-bezpośredni kontakt z wydzieliną/wydaliną chorego zwierzęcia
-poprzez uszkodzoną skórę, błonę śluzową
-łożysko
Przebieg kliniczny:
-zapalenie węzłów chłonnych i spojówek
-infekcje skórne
-zapalenie kości, szpiku, stawów
-zapalenie wsierdzia, otrzewnej, żołądka, jelit i płuc
-zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych i mózgu
-posocznica
5) Przygotowanie próbki do badan i etap namnażania Campylobacter
Przygotowanie próbki do badań- w celu przygotowania zawiesiny wyjściowej zmieszać określoną ilość x próbki z 9-ciokrotną (9x) objętością płynnej pożywki namnażającej bulion Boltona, aby otrzymać stosunek wielkości naważka/ pożywka równy 1:10 i homogenizować.
Namnażanie – inkubować zawiesinę wyjściową w atmosferze mikroaerofilnej w temp 37 st C przez 4 do 6 h, a następnie w temp 41,5 st C przez 44h.
6) Jakie są etapy wykrywania E.Coli 0157 (od ims w dół)
· Posiew
Używając pipety automatycznej przenieść 50 mikrolitrów przemytej zawiesiny cząstek magnetycznych do płytek z pożywką agarową MacConkey z cefiximem, tellurynem, sorbitolem (CT-SMAC) jak również do płytek z drugą pożywką izolacyjną.
Posiewy na pożywce CT-SMAC inkubować w temp. 37 st C przez 18 do 24 h, a z drugą selektywną pożywką inkubować w zalecanej temp i podanym czasie.
· Rozpoznawanie typowych kolonii E.coli 0157
Na pożywce agarowej CT-SMAC typowe kolonie są przezroczyste i słabo zabarwione, z żółtobrązową otoczką o średnicy 1 mm.
· Potwierdzanie
Kolonie posiać do probówki z pożywką tryptonowo/tryptofanowi. Inkubować w 37 st C przez 24 h. Dodać 1 ml odczynnika Kovac’sa i pozostawić na 10 min.
Czerwona barwa- wynik dodatni
Żółtobrązowa barwa- wynik ujemny
Do badań serologicznych z surowicą E.coli 0157 wybrać tylko kolonie o reakcji indolowi dodatniej.
Na szkiełko przykrywkowe nanieść kroplę fizjologicznego roztworu soli. Ezą rozetrzeć kroplę roztworu z 1 kolonią pobraną z płytki z agarem, tak aby powstała gęsta zawiesina. Poruszać szkiełkiem 30-60 sek.
Wyraźne zmętnienie – szczep auto-aglutynujący i nie powinien być dalej badany
Pojedyńczą kolonię zawiesić w kropli fizjologicznego roztworu soli i dodać kroplę surowicy E.coli 0157
Aglutynacja w ciągu 1 min. – reakcja pozytywna
7) Objawy zatrucia pokarmowego Clostridium perfringens
Zatrucie pokarmowe:
-nagła kolka jelitowa i biegunka
-wymioty (niezbyt często)
-wylęganie 8-22 godz
-przebieg choroby jest łagodny i krótki (1 dzień)
-głównie potrawy mięsne
-rezerwuar – przewód pokarmowy ludzi i zwierząt
8) TESTY POTWIERDZAJĄCE DLA LISTERIA SP.
· Test na wytwarzanie katalazy – pobrać pojedynczą kolonie i zawiesić w kropli nadtlenku wodoru. Natychmiastowe pojawienie się banieczek gazu wskazuje na reakcję dodatnią
· Barwienie matodą Grama – wykonać barwienie matodą Grama materiału pobranego z pojedynczej koloni. Bakterie są widoczne w preparacie w postaci Gram-dodatnich, cienkich i krótkich pałeczek.
· Test na wykrywanie zdolności ruchu - pobrać wybraną kolonię i przenieść do probówki z pożywką TSYEB. Inkubować w cieplarce w temp 25 °C przez 8 do 24h do uzyskania zmętnienia pożywki. Pobrać ezą krople uzyskanej hodowli i przenieść na czyste szkiełko podstawowe, nakryć szkiełkiem podstawowym i oglądać pod mikroskopem. Pod mikroskopem obserwuje się cienkie krótkie pałeczki wykazujące zdolność ruchu o nieuporządkowanym charakterze
9) CHARAKTERYSTYKA CAMPYLOBACTER
Charakterystyka bakterii rodzaju Campylobacter:
· gram ujemne, nieprzetrwalnuikujące
· wydłużone, spiralnie skręcone
· 0,5 – 5,0 um długości, 0,2 – 0,5 um szerokości
· wykazują ruch (witki)
· mikroaerofilne (3 – 15% O2, 5 – 10% CO2)
· temperatura wzrostu (30 stopni C min., 41,5 – 42 stopnie optimum, 45 stopni maks)
· pH (4,9 min., 6,5 – 7,5 optimum, 9,0 maks)
· NaCl (0,5% optymalnie, 1,5 maks)
· Aw (0,987 min., 0,997 optimum)
Występowanie Campylobacter species:
· składnik normalnej flory przewodu pokarmowego
o ptaków domowych i wolnożyjących
o bydła
o owiec i kóz
o psów i kotów (w warunkach domowych!)
· otwarte zbiorniki i cieki wodne
o wody powierzchniowe rzek i zbiorników
o wody gruntowe
o osady denne
· DRÓB JEST UWAŻANY JAKO GŁÓWNY REZERWUAR
o wewnętrzna temperatura drobiu jest odpowiednia dla rozwoju Campylobacter
Toksyny wytwarzane przez Campylobacter:
· enterotoksyna – podobna w działaniy do toksyny cholery, wywołuje wodniste biegunki (ok 50% szczepów)
· cytotoksyna CDP – powodująca wysłużanie i pękanie komóek oraz dgradację DNA (obecna u większości szczepów)
· hepatotoksyna – zapalenia wątroby
· hemolizyna – nie jest wydzielana a uwalniana dopiero podczas lizy komórki
10) HORYZONTALNE METODA WYKRYWANIA E. COLI
Zasada metody
1. Namnażanie homogenizowanej nadważki w zmodyfikowany, bulionie tryptonowo-sojowym zawierającym nowobiocynę (mTSB+N) w temperaturze 41,5°C ± 1 °C przez 6h i następnie przez dalsze 12h do 18h
2. Separacja i koncentracja drobnoustrojów za pomocą immunomagnetycznych czastek opłaszczonych przeciwciałami anty E.coli O157
3. Izolowanie za pomoca posiewu immunomagnetycznego cząstek z przylegającymi bakteriami na pożywkę agarową MacConkey z cefiximem, tellurynem, sorbitolem (CT-SMAC) i na drugą wybraną przez użytkownika selektywna pożywkę agarową
4. Potwierdzenie kolonii sorbitolo-ujemnych pobranych z pożywki ST-SMAC i typowych kolonii E. coli z drugiej izolowanej, z uwzględnieniem wytwarzania indolu i aglutynacji z surowicą E. coli O157
11) CECHY BAKTERII PRZETRWALNIKUJĄCYCH NA POŻYWCE WILLIS-HOBBSA
Wstępna identyfikacja na pożywce Willis – Hobbsa
12) CO TO JEST GNICIE GŁĘBOKIE I PRZY POMOCY JAKICH BAKTERII PRZEBIEGA?
W zależności od mikroflory powodującej rozkłąd mięsa rozróżnia się :
· rozkład powierzchniowy (zewnętrzny) – zapoczątkowany przez drobnoustroje tlenowe
· rozkład głęboki – powodowany przez bakterie beztlenowe
Przemiany proteolityczne zewnętrznych warstw mięsa rozpoczynają tlenowce, stwarzając przez intensywny pobór tlenu warunki dla rozwoju beztlenowców względnych nawet na powierzchni mięsa. W miarę wnikania w głąb tkanek i alkalizacji środowiska, zaczynają się rozwijać beztlenowce. Typowy rozkład gnilny występuje rzadko, najczęściej proces ten jest wywołany przez gnilną mikroflorę tlenowa i beztlenową.
· laseczki przetrwalnikujace beztlenowe: Clostridium sporogenes i Clostridium butyricum
13) TEST NA WYTWARZANIE INDOLU
· niewielką ilość materiału z badanej kolonii posiać ezą do 5 ml pożywki tryptonowo – tryptofanowej
· inkubować w temp. 37 stopni przez 24 godziny
· po inkubacji dodać 1 ml odczynnika Kovacsa
· wynik dodatni – wytworzenie czerwonej obrączki, powstanie żółto – brązowej obrączki świadczy o wyniku ujemnym
14) Z JAKICH CZĘŚCI TUSZY POBIERA SIĘ MATERIAŁ NA SALMONELLE (U WSZYSTKICH GATUNKÓW)?
· w przypadku bydła próbki pobierano z:
o karku,
o mostka (szponder)
o boku (pachwina)
o pośladków (zad)
· w przypadku owiec lub kóz próbki pobierano z:
o boku,
o podgardla
o boków klatki piersiowej
o mostka
· w przypadku swiń próbki pobierano z:
o grzbietu
o podgardla (albo policzków)
o tylnych nóg (szybki)
o brzucha (boku klatki piersiowej)
· w przypadku koni próbki pobierano z:
o pośladków15) zasada metody wykrywania Salmonella
a)przednamnażanie- w wodzie peptonowej, która jest pożywką nieselektywną i namnaża wszystkie bakterie, wykonujemy aby doszło do regeneracji zniszczonych komórek Salmonella. Gdybyśmy od razu posiali próbkę na podłoże Salmonella mogłaby nie wyrosnąć
b)namnażanie- jest ono selektywne na płynnych pożywkach selektywnych
c)różnicowanie- wykonujemy na podłożach agarowych
d)identyfikacja w oparciu o testy biochemiczne i serologiczne- w celu upewnienia się czy to na pewno Salmonella 16) eliminacja szczepów autoaglutynacyjnych dla salmonella
nanieś jedną kroplę roztworu fizjologicznego NaCl na oczyszczone szkiełko podstawowe. Zawiesić pobrany ezą materiał badanej kolonii w taki sposób, aby uzyskać homogenną i jednolicie zmętniałą zawiesinę. Delikatnie poruszać szkiełkiem przez 30-60 sekund. Reakcję odczytać na ciemnym tle. Jeżeli bakterie ulegną połączeniu, tworząc mniej lub bardziej widoczne strąty, to badany szczep uznajemy za autoaglutynacyjny i nie powinien być używany do dalszych oznaczeń serologicznych.17)metoda oznaczania liczby b.cereus
...
borys.karawaning