Hodowla komorek i tkanek polega na utrzymaniu ich przy zyciu poza organizmem (in vitro) min. Przez 24h zalety możliwość pelnej kontroli sr. Hodowlanego, wyeliminowanie zlozonosci zywego organizmu, badania mogą dotyczyc danego typu komorek, brak kwestii moralnych wady zachowanie ciaglej sterylności, wysokie koszty hodowli h. pierwotna zakladana z materialu pobranego bezpośrednio z organizmu, uzyskanego z eksplantow lub z zawiesiny (uzyskanej mechanicznie lub enzymatycznie) h. wtorna uzyskana po pierwszym pasazu do nowego naczynia kokultura hodowla gwoch typow komorek, komórki zlabo proliferujące o dużych wymaganiach hoduje się na warst odżywczej np. fibroblasty h. przestrzenne hodowle narządowe, agregatow, steroidow utrzymanie sterylności pomieszczenia, eksperymentatorow, sprzętu, odczynnikow r. zakazen bakterie, grzyby wirusy, mykoplazma(niewielkie drobnoustroje, wplywaja na zmiane funkcji, morfologii, metabolizmu kom, szaczunki-ok. 10-30% hodowli zakazonych, odporne na antybiotyki), z atmosfery, z przestrzeni roboczej Unikanie zakazen aseptyczne techniki, sterylizacja prz roboczej, sprzętu, odczynikow, hodowla z antybiotykami sterylizacja zabiegi prowadzące do zabicia i usuniecia drobnoustrojów (m. fizyczne:termiczna, filtracja, pr. UV. M. chem: aldehydy, alkohole, fenole, zw. I i Cl) wzrost zależy od r. podloza, fiyzykochemicznych wł. Medium pożywki, skladu fazy gazowej, temp inkubacji. Podloze hodowlane niezbędne do adhezji, proliferacji, ekspresji i funkcji komorek (naczynia szklane, plastik-polistyren) modyfikacja podloza pokrycie kalogenem, fibronektyna, laminina, alestyna, niektóre kom wymagają ko-kultury z innymi, mikronosniki, matryce do hodowli 3D medium (pozywka) (media naturalne, syntetyczne) zapewnia odpowiednia ilość skl. Odżywczych, zapewnia odpowiednie pH i rownowage osmotyczna surowica cenne uzupełnienie pożywek 5-20%, zwieksza przezywalnosc i proliferacje komorek, zrodlo hormonow, czynn wzrostu, bialek transportujących i adhezyjnych, inhibitorow proteaz ograniczenia w stosowaniu zmienność osobnicza-brak pewności o składzie następnych partii surowic(mogą roznic się iloscia cz. Wzr, przeciwciała, subst toksycznych), ryzoko zakzen wirusami i mykoplazma, antybiotyki penicylina,streptomecyna,gentamycyna, używane do powstawania szczepow odpornych na mykoplazme,stosowanie przy zakładani hodowli pierwotnych dodatki do pożywki czynniki wzrostu, hormony, antybiotyki, leki przeciwgrzybiczne, bufory (zapobiegają zmianom pH) o utrz wl pH decyduje rodzaj buforu-podst składnik dwuwęglan sodu, powstające jony alkalizuja srodowisko lub neutralizuje kw metabolity (rodzaj: węglanowe lub organiczne HEPES), stężenie CO2, dostep CO2 do komorek wyymiana gazowa w k. in vitro (w wysokim stężeniu tlen jest zabójczy dla komorek) wysokie stęż CO2, brak transporterow tlenu, deficyt tlenu cisn osmotyczne 260-320 mOsm/kg temp 37C ptaki 39C fibroblasty skory 35C wilgotnosc 70-80% inkubator CO2 -5% metabolizm pirogronian nie jest przekształcany do acetylo-CoA, deficyt tlenowy powoduje ze synetza NAD nie jest wydajna, pirogronian przeksztalcany jest w mleczan zużycie glukozy 96% glikoliza, 3%cykl krebsa, 1% cykl pentozofosforanowy glutamina glukoza->glikoliza->2ATP substrat energetyczny, z niej powstaje L-ketoglutanal (może być wlaczone do cyklu krebsa), zwieksza przezywalnosc komorek, zwieksza tempo podzialu adhezja komorkowa nieliczne komórki mogą rosnąć w h. zawiesinowych (czynniki sprzyjające adhezji: ladunek powierzchniowy, podloza,jony,bialka ER, receptory na pow. komorek) (bialka uczestniczące w adhezji: integryny, kadhezyny, selektyny)cykl komórkowy G1 (wzrasta akt. metabolitów, synteza enzynow, komorka rosnie, czas trwania zmienny), G0 komórki przeprowadzają wszystkie reakcje metaboliczne, ale nie mogą się dzielić. Podlegają specjalizacji. Charakteryzują się wówczas obniżonym tempem metabolizmu, mniejszą aktywnością transkrypcyjną. S(podwojenie DNA, chromosom ma 2 chromatydy siostrzane, transkrypcja RNA minimalna),G2 (wrasta biosynteza bialek, możliwe zatrzymanie cyklu lub naprawa DNA lub apoptaza), M(mitoza – chromosomy wedruja miedzy komórki potomne, cytokineza –podzial cytoplazmy)sortowanie komorek w zalezosci od wielkości i gestosci –wirowanie w grandiencie gestosci(sacharoza,glicerol,fikol), ze względu na obcecnosc markerow powierzczniowych (sortery magnetyczne, cytometr przepływowy) starzenie komorek (cechy starych komorek: zahamowanie wzrostu i podzialow, zmieniona morfologia, zmieniona ekspresja genow, zmniejszona odporność na apoptoze) limit hayflicka – komórki dziela się okreslona ilość razy 30-50 i przy każdym podziale w chromosomach skracają się telomery-skutkiem jest zaprzestanie podzialow. Szok hodowlany – niektóre komórki wchodzą w faze starzenia majac długie telomery. Sygnalem do zaprzestania dzielenia się jest stres oksydacyjny i kontakt z innymi komorkami
Rainhardt