Techniki-biologii-molekularnej-1.pdf

(1140 KB) Pobierz
klonowanie gen
w
Badanie genu na poziomie molekularnym (ustalenie
sekwencji, struktury
egzonowo
intronowej
,element
w promotora, miejsc inicjacji i
terminacji
transkrypcji itp.) wymaga ok. 1 mg DNA tego genu.
Przed wynalezieniem metody PCR, dla uzyskania
takiej ilo
ś ci DNA ludzkiego genu (stanowi on jedn
milionow
c ęść
genomu cz
ł owieka), trzeba by wyj
ś z 1 kg ludzkiego DNA, a nast
pnie z ca
ł ego
wielokrotnie powt
rzonego genomu oddzieli
ć DNA
badanego genu.
Rozwi
zaniem jest (by
ł o?)
 
DNA no
ś nika/wektora
(ii)
(ale nie organizm
w!):
(i)
z pojedynczej kom
rki, bli
n
ta i wieloraczki 1
jajowe.
Niekt
re ro
ś liny mo
na klonowa
ć przez podzia
ł na cz
ęś
ci
Klon
grupa
identycznych pod wzgl
dem genetycznym
organizm
w wywodz
cych si
od wsp
lnego przodka
Klonowanie gen
w
hodowla klon
w zawieraj
cych
zrekombinowane
DNA
by uzyska
ć jednorodny materia
ł do izolacji DNA
klonowanego genu.
Naturalne klony
kolonie bakterii czy dro
y wyros
ł e
wprowadzenie go do kom
rek gospodarza
(bakterii, dro
y, rzadziej linii kom
rkowych)
(iii)
(bulwy ziemniaka, p
dy begonii) lub regeneracj
pojedynczych protoplast
w.
utworzenie
zrekombinowanego
DNA
po
ł czenie
wybranego (klonowanego) fragmentu DNA z ma
ł ym
 
wyb
wektora
Ib.
Etapy
klonowania
gen
Ia.
wyb
rDNA do
klonowania
II.
przygotowanie
zgodnych
ko
ń III. po
ł czenie (
ligacja
)wektora
zklonowanym
DNA
IV.
selekcja
poszukiwanego
klonu
(VI.)
analiza
sklonowanego
DNA
wprowadzenie
zrekombinowanego
DNA do
kom
rek
gospodarza
transformacja
)V.
 
lacZ
, promotor
faga
T7/SP6,
plazmid
phagemid
jako
no
ś nik
wprowadzenie
do
Wektor
ma
ł c
steczka DNA umo
liwiaj
ca
organizmu
fragmentu
obcego
DNA.
Wektor
musi posiada
ć * znacznik
(marker)
umo
liwia selekcj
GMO
* dogodne
miejsce/a do klonowania
( MCS
* miejsce/a startu replikacji
ori
i/lub ars)
zapewnia
namna
anie
wektora wraz ze sklonowanym fragmentem
mo
posiada
ć dodatkowe sekwencje u
ł atwiaj
ce selekcj
lub analiz
sklonowanego fragmentu
np
 
1347585481.001.png 1347585481.002.png
faga
λ )3
44
kb
lambdowe
insercyjne
10
kb
substytucyjne
23
kkosmidy
(plazmid z sekwencjami
cos
z
kb
fosmidy
(ori
plazmidu F + sekwencja
cos
z
Wektory
wlk
. wstawki
plazmidowe,
fagemidowe
10
faga
λ )~ 40
kpochodne bakteriofaga P1
7
100
kb
sztuczne chromosomy
fagowe
PAC (pochodne P1) 100
300
kb
sztuczne chromosomy bakteryjne BAC (pochodne F) 75
350
kb
sztuczne chromosomy dro
owe YAC
0,2
2 Mb
wektory ro
ś linne (
DNA
nie istnieje wektor uniwersalny
 

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika:

Zgłoś jeśli naruszono regulamin