restrykcja_ligacja_prezentacja2.pdf

(1341 KB) Pobierz

Cięcie DNA prokariotycznego (λ DNA) i

eukariotycznego (jęczmiennego) za pomocą

endonukleaz restrykcyjnych oraz ligacja

fragmentów restrykcyjnych

Enzymy restrykcyjne

są to enzymy, które wiążą się specyficznie z

DNA i tną podwójną helisę wewnątrz lub w pobliżu krótkich

sekwencji nukleotydowych, które rozpoznają.

•

Pierwszy wyizolowany enzym restrykcyjny

W 1968 r Arber i Linn wykazali aktywność endonukleazy - enzymu wyizolowanego

Escherichia coli

szczep B; w tym samym roku Meselson i Yuan oczyścili podobny

enzym z

E. coli

szczep K.

•

4 pz:

Taq

HpaII, MspI

•

6 pz:

EcoR1, HindIII, BamH1, PstI, SalI

•

8 pz:

Not

Sfi

http://moja-biologia.blogspot.com/2013/04/wirusy.html

Dlaczego endonukleazy nie tną DNA bakterii,

która je produkuje?

Zazwyczaj organizmy, które produkują enzymy restrykcyjne

posiadają również odpowiedni enzym/y modyfikujący/ce (DNA

metylotransferazy) nukleotydy w sekwencjach stanowiących

miejsca restrykcyjne dla tych enzymów we własnym DNA.

Zapewnia to ochronę ich własnego DNA przed cięciem.

Enzym metylotransferaza rozpoznaje te same sekwencje DNA,

co odpowiadająca mu endonukleaza, jednak zamiast cięcia DNA,

maskuje takie miejsce przez metylację jednej z zasad w każdej

z nici DNA.