1. wykrywanie ligniny za pomocą błękitu toluidyny (tolonium chloride)
błękit toluidyny:
metachromaza
wiąże się też z DNA i RNA
materiał: łodyga dyni utrwalona
świeża łodyka np. przymiotno bez czarny
wykonanie:
0,05% roztwór wodny błękitu toluidyny O
preparaty świeżo krojone umieścić w roztowrze wodnym błękitu na 20 sek. do 3 min
przepłukać kilkukrotnie wodą destylowaną i w niej oglądać
używane w całej grupie
Cucurbita pepo f. Cucurbita
zea mays f. Poacea
hydera helix f. Araliaceax
medicago sp f. Fabaceae
Saintpaulia sp. f Gesnariaceae
u nas
kukurydza
bluszcz
dynia
lucerna pod skórką zielona bo od chlorofilu
od barwienia, fiolet, niebieski
włókna łykowe drwino niebieski lignina
łyko różowy
ligina jeden kolor
lignina kontowa – czewony
senpolia wiele ciemnego, widoczne naczynia z helikalnymi strykturami
dynia: kolenchyma, sklerenchyma
kukurydza: inaczej barwi się DNA a inaczej RNA (najwięcej w jąderku, różowo czerwone)
łyko we wiązkach przewodzących na czerwony
drewno
bluszcz; zielono drewno i drewno wtórne włókno łykowe
łyko i kora pierwotne
2. identyfikacja kalozy
kaloza:
polisacharyd
ßglukan
reszty grulozy połączone wiązaniami ß1,3
nierozpuszczalna w wodzie
występowanie
kallus w miejscach zranień
w hodowlach tkankowych
w odpowiedzi na inforkjcę patogenne
w odpowiedzi na stres wywołany przez ABA, glin
pory w plytkach sitowych
łagiewka pyłkowa w postaci zatyczki
(systemowy a systemiczny)
materiał: łodyga dyni
błękit rezorcyny (lakmoidem)
inkubacja w 0,01% lub 0,02% lub 0,05% roztworze rezorcyny 10-15 min
płukanie wodą 3×1min
zielone drobne elementy na szarym tle na poprzecznym -
niebieskie na poprzecznym – płytki sitowe, konkretnie pory – kaloza, czasem niespecyficznie sklerenchymatyczny perycykl
3. Barwienie kalozy do mikrospoku fluorescencyjnego błękitem aniliny
inkubacja w 0,01% roztworu błękitu aniliny w buforze foforanowym pH 8,2 10-15 min
płukanie w wodzie 3×1min
inkubacja w 1% kwestia octowym 3min
plukanie w wodzie 5 × 1min
obserwacja w mikroskopie fluorestencyjnym przy pobudzeniu światłem uv
błekit aniliny 0,01% ph 8 – brak zabarwienia płytek sitowych
ph 4,5 – niektóre na niebiesko
mikroskop fluorestencyjny lignina
ściana komórkowa barwienie
wykrywanie lingniny barwienie błękitem toluidyny i autofluorestencja
3. cytochemiczne metody identtyfikacji precypitatów wapnia z zastosowaniem antymonianu potasu do mikroskopu elektronowego – analiza elektronogramów
4. wykrywanie wapnia w komórkach przy użyciu czerwieni alizaryny
wapapń
aktywator enzymów
przekaźnik wtórny kinazy białkowe (a są inne?)
przewodzenie impulsów bioelektrycznych
obniża stopień uwodeniania koloidów komórkowych
barwienie czerwienią alizaryny
świeży lub utrwalony
roztwór barwnika w pH 4,4 i 6,5
woda demineralizowana zkrawki do czerwieni 3 min
w mikroskopie świetlnym
płukać 3×1min
ph4 cystolit
ph 6,5 cystolit intesywniejszy
cebula nie wybarwiona
w fikusie kryształy węglanu wapnia
w cebluli stawianu wapnia
mikroskop elektronowy transmisyjny
mechanizm reakcji
antymonian potasu rozpuszczalny w wodzie
antymonian sodu – słabo rozpuszczalny w wodzie
antymoian wapnia prawie wcale nie rozpuszczalny
podczas znakowania wytrącają się różne sole antymonianu
reakcje kontrolne sprawdzenie
czy jestantymonian
jaka to sól, który kation
procedura
utrwalanie 2,5% glutaraladehydu + 2% antymonianu potasu w buforze fosforanowym ph 7,6 - 12 godizn
kontrole
pominięcie antymonianu
usunięcie ciemnych strątów ze skrawsków za pomocą substancji chalatującej wapń egta
siatki już oglądane umieścić w kontro…
wrib.biologia